激 光 论 坛 LASER TRIBUNE 香港,2018年9月28日出版 会员资料 第18卷第9期 700 fs激光曝光过程中牙髓干细胞的光损伤 [德国] Karsten König & Anton Kasenbacher 材料和方法 细胞 将 成 人 牙 髓 中 提 取 的 人 干 细 胞 ( 由 S.Gronthos,NIH,贝塞达斯,美国提供) 培养在Gibco BRL生命科技公司(苏格兰佩 斯利)的1/8改良的Eagle’s培养基中,加入 20%FCS,2mML-谷氨酰胺,100μML-抗坏 血酸-2-磷酸酯,100μM青霉素和100μg/ ml链 霉素在5%CO 2和37℃下在25ml和75ml细胞 培养物中的溶液(Greiner,Frickenhausen,德 国)。处理细胞进行实验,并在37℃用0.25% 胰 蛋 白 酶 , 5mM葡 萄 糖 , 0.05% EDTA的 PBS溶液培养5分钟。 从培养基底部分离后, 将细胞在细胞室(MiniCeM,JenLab GmbH, Jena,德国)中进行激光显微镜检查。 之前在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞上进 行过比较研究,这些细胞在许多国际实验室 都作为参考细胞。 将CHO细胞在含有10%FCS,L-谷氨酰 胺和青霉素、链霉素和两性霉素B的抗生素 混合物的Dulbeccos HAM-F12培养基(Gibco BRL)中并且是5%CO 2和37℃下孵育。胰蛋 白酶化与干细胞相对应。 个别细胞在外部玻璃窗上有特殊的菱形 图1:飞秒激光系统与脉冲拉伸装置。 雕刻。在检测细胞损伤的情况下,利用相衬 技术可以很容易地定位这些雕刻。 中心波长处实现的。在辐照后,细胞被转移到 培养箱中,以保证进一步生长、细胞分裂和修 激光显微镜 复过程的最佳条件。 80 MHz Ti:Sa激光,Mai Tai (0spectral - physics, Mountain View, USA)在近红外光 脉冲拉伸装置,产生和测量700 fs脉冲 谱(NIR)中应用于飞秒激光显微术。使用 为 了 将 样 品 的 脉 冲 持 续 时 间 提 高 到 测量仪器Fieldmaster(Coherent,Santa Clara, 700fs,在显微镜前的光路中实现了脉冲链路 USA)和测量头LM2确定显微镜入口和物镜平 单元。该装置由镀膜反射镜和两个平行排列 面(样品的功率)处的激光功率,并且在必 的镀金光栅组成,光栅常数为600行/毫米。第 要时通过灰色滤光片进行变化。所测量的值 二个光栅被安装在一个具有微米精度的机动台 是在提交的协议中被指定的。与空气相比, 面上。脉冲宽度随光栅距离的变化而变化。激 这种校正来自有限的测量区域并且改变了介 光束通过第一个光栅接收到空间色散,在第二 质中的辐射条件。 个光栅处进行补偿(图1)。 激光显微镜是通过改进的 LSM 410( 脉冲持续时间最初是在MINI(APE,柏 ZEISS,Jena,德国)用40x / 1.3油浸物镜实 林,德国)自动相机的激光出口处用中心发射 现的。激光扫描时间t = 16s的显微镜扫描方式 波长为88fs,在800nm处为80fs,在850nm处为 512×512用于细胞照射。这些细胞在同一焦点 91fs来确定的,假定了高斯函数。一般来说, 平面上被扫描了10次。这些实验是在800nm的 由于发散光束的存在,被测物体焦平面的测量 图2:激光导致的破坏率(致死率)。 www.dentistx.com